Séminaire

Lieu : Salle de Conférences Angelos Kalogeropoulos - Bâtiment 400

Résumé :

Nous avons mis au point un montage de micro-FACS basé sur un microscope de fluorescence et une cellule microfluidique. Le gène codant pour la protéine fluorescente morange a été cloné dans divers plasmides (faible, moyen et grand nombres de copie), sous le contrôle d’un promoteur réprimé et inductible. L’intensité de fluorescence mesurée à l’aide du micro-FACS sur une bactérie unique Escherichia coli est proportionnelle au nombre total de protéine fluorescente qu’elle contient. La quantité de protéine fluorescente étant liée au nombre de copie de gène, nous déterminons le nombre moyen ainsi que l’écart type de la distribution du nombre de copie de gène au niveau d’une population isogénique. L’écart type est une mesure de la variabilité du phénotype "nombre de copie de gène" que nous avons choisi de quantifier. Nous présenterons nos résultats préliminaires concernant le lien entre la variabilité et l’adaptabilité de la population bactérienne à un incrément de dose d’antibiotique.

Invité par : Marie-Joëlle VIROLLE

 Séminaire

Lieu : Salle de Conférences Angelos Kalogeropoulos - Bâtiment 400

Abstract :

Enterococci are widespread in nature and intestinal commensals of humans and many other animals. Especially two species, E. faecalis (Efs) and E. faecium (Efm), have emerged over the past few decades as the second or third most common cause of nosocomial infectious disease worldwide. These organisms cause increasing concerns in hospitals since they are among the most antibiotic resistant bacterial pathogens known.

E. faecalishas a highly developed glycerol metabolism. Indeed, glycerol can be catabolized by two different pathways. Either it is first oxidized by glycerol dehydrogenase and then phosphorylated by dihydroxyacetonekinase (DhaK pathway) or it is first phosphorylated by glycerol kinase and then oxidized by glycerol-3-phosphate oxidase (GlpK pathway). In both cases, this leads to theformation of the glycolytic intermediate dihydroxyacetone. The corresponding genes of both pathways are clustered in two operon structures. Analysing different E. faecalis isolates showed that the pathway which is preferentially used under these conditions is strain dependent.

Reactive oxygen intermediates (ROI) are playing a central role in pathophysiology of clinical infections. They exhibit a broad spectrum of biotoxicity and are crucial to the nonspecific host defence of phagocytes. Microorganisms have developed strategies to neutralize oxidants. The implicated activities are important virulence factors and responsible for tolerance to antibiotics. E. faecalis is particularly well equipped with antioxidant activities. We used glycerol catabolism for the characterization of mutants affected in these oxidative defense activities since this leads to the formation of an internal oxidative stress by the production of H2O2via glycerol oxidase.

Enterococci are naturally tolerant to bactericidal antibiotics. These pathogens resist killing when exposed to high concentrations (20 fold the Minimal Inhibition Concentration) of these drugs. The molecular reasons of this extraordinary tolerance are still incompletely understood. Previous works showed that resistance to killing collapsed in mutants affected in superoxide dismutase (Sod) activity. Due to its known activity, the conclusion of these studies was that obviously bactericidal antibiotic treatment led to induction of a superoxide (O2-.) burst which is lethal only in the absence of Sod. Our very recent work showed that the degree of tolerance loss of ∆sodA mutants is dependent on the energy source present during antibiotic treatment. Hexoses induce greater killing than the pentose ribose. Glycerol as the energy source restored tolerance to wild-type level. These results seem to highlight the upper part of glycolysis as crucial for antibiotic mediated killing of the ∆sodA mutants.

Invité par : Marie-Joëlle VIROLLE

 Soutenance de Thèse

Lieu : Salle de Conférences "Angelos Kalogeropoulos" – Bât. 400

Résumé :

L’utilisation de virus de bactéries ou bactériophages pourrait être un complément efficace à l’antibiothérapie. Mon travail a porté sur la caractérisation de bactériophages dirigés contre l’espèce Pseudomonas aeruginosa, pathogène opportuniste responsable d’infections des voies respiratoires des patients atteints de mucoviscidose.

J’ai tout d’abord déterminé la sensibilité des souches mucoviscidosiques au Pyophage (un cocktail de phages thérapeutiques Géorgien) et identifié six phages lytiques de quatre genres différents. Environ 15% des souches sont résistantes au Pyophage. Ensuite, en utilisant les souches cliniques multi-résistantes aux phages comme bactérie d’enrichissement, 32 phages ont été obtenus à partir des eaux usées de France et Côte d’Ivoire. Tous les phages analysés sont caudés et distribués au sein de dix genres parmi lesquels six exclusivement lytiques. J’ai identifié des souches bactériennes qui demeurent insensibles à tous les phages. J’ai montré que le système CRISPRs-Cas n’est pas associé à la résistance des souches aux phages lytiques.

Abstract :

The use of viruses of bacteria commonly called bacteriophages could constitute an efficient complement to antibiotics. During my PhD, I have characterized phages infecting the opportunistic pathogen Pseudomonas. aeruginosa, responsible for lung infections in cystic fribrosis patients.

Firstly, I investigated the efficiency of Pyophage (a cocktail of phages therapeutic Georgian) on clinical P. aeruginosa strains and recovered six lytic phages from four different genus. The Pyophage appears to be unactive on approximately 15% of clinical strains. Secondly, and using multi-phages resistant strains as enrichment bacteria, 32 phages were isolated from waste water of France and Côte d’Ivoire. All phages are tailed and distributed within ten different genus including six exclusively lytic. I identified bacterial strains which remain insensitive to all phages. I also demonstrated that the CRISPRs-cas system plays no role in the resistance of strains to lytic phages.

Directeur de Thèse : Christine POURCEL